科研-磺胺甲基嘧啶檢測試劑盒

產品品牌：睿信生物 商品貨號：RXSP0031

文獻($TCount)

說明書
  • 產品售價： 1600
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反應種屬 /
檢測范圍 若需獲取詳細內容及操作程序，敬請下載產品說明書查閱。
物理性能 液體組分應澄清，無沉淀或絮狀物；所有組分應無包裝破損。
用途 僅供科研使用，定量檢測樣本中的磺胺甲基嘧啶的殘留量。
實驗原理 若需獲取詳細內容及操作程序，敬請下載產品說明書查閱。
特異性 /
重復性 批內變異系數 CV%小于 10%，批間變異系數 CV%小于 15%。
回收率 若需獲取詳細內容及操作程序，敬請下載產品說明書查閱。
試驗所需自備試驗器材 1、酶標儀
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動洗板機
5、25℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml 量筒
7、無粉一次性乳膠手套
操作程序 1、將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做 2 孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
2、加標準品或樣本 50?l/孔到各自的微孔中，然后加酶標記物 50?l/孔，再加入 50?l/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩 5 秒混勻，25℃反應 45 分鐘。
3、小心揭開蓋板膜，甩去孔內液體，每孔加 350ul 工作洗滌液，靜置 30 秒后棄去，重復洗滌 5 次，最后一次拍干（用吸水紙拍干，拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
4、每孔加入底物液 A 50?l，再加底物液 B 50?l，輕輕振蕩 5 秒混勻，25℃避光顯色 15 分鐘（若藍色過淺，可適當延長反應時間）。
5、每孔加入終止液 50?l，輕輕振蕩混勻，終止反應。
6、用酶標儀于 450nm 處測定每孔吸光度值（建議用雙波長 450/630nm）。測定應在終止反應后 10 分鐘內完成。
注意事項 1：如果試劑盒的組份需要再次使用，請確保上一次使用之后沒有被污染。
2：酶標板單次未使用完，要謹記密封放到 2-8℃保存。
問題分析 ①問題描述：標準曲線差
可能原因及相應對策：
1.試劑盒平衡時間不夠——不低于 2 個小時的室溫平衡
2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌
3.移液不精確——檢查和校正移液器
②問題描述：精密度低
可能原因及相應對策：
1.洗滌不充分——按說明書要求充分洗滌和浸泡
2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑
3.重復利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模
4.加樣不精確——檢查和校正移液器
③問題描述：O.D值低
可能原因及相應對策：
1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器，精確加入試劑
2.溫育時間不正確——保證充足的溫育時間
3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準確的溫育溫度
4.酶標記物或底物失效——通過混合酶標記物和底物，顏色迅速顯現來檢查
5.沒有加入終止液——按照說明書實驗操作步驟加入終止液
6.超出讀數時間讀數——在說明書推薦的讀數時間內讀數
④問題描述：樣本值
可能原因及相應對策：
1.不正確的樣本儲存方式——正確儲存樣本，使用新鮮樣本進行實驗
2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法
3.待測物質在樣本中含量低——使用新鮮樣本，重復實驗
聲明 該試劑盒僅供研究使用，如將其用于臨床診斷或任何其他用途，我公司將不對因此產生的問題負責，亦不承擔任何法律責任。

 ELISA試劑盒常見問題與解析

ELISA（酶聯免疫吸附試驗）作為實驗室的“金牌檢測員”，在疾病診斷、生物標志物檢測、藥物研發(fā)等領域大顯身手。但再成熟的技術，也可能因為一個小細節(jié)“鬧脾氣”——標準曲線擬合不佳、信號忽高忽低、背景噪音干擾……別擔心！睿信生物憑借多年ELISA研發(fā)經驗，幫你揪出問題根源，讓實驗數據穩(wěn)穩(wěn)當當！

一、ELISA實驗常見問題大盤點

1. 標準曲線“翻車”——擬合度差、線性不佳

問題表現：標準曲線的R²值低于0.99，甚至出現“S”形或雜亂無章的趨勢。
可能原因：

標準品稀釋錯誤（梯度沒做好或混勻不充分）。

標準品反復凍融導致降解。

酶標板洗滌不徹底，孔間殘留液體影響吸光度。
解決方案：

標準品現配現用，避免多次凍融，稀釋時嚴格按說明書操作。

確保洗滌步驟規(guī)范，洗板機噴嘴無堵塞，手工洗板時甩干并拍干。

如果曲線仍不理想，嘗試更換標準品或檢查酶標儀波長是否準確。

 

2. 信號值太低——目標蛋白“隱身”了？

問題表現：樣本OD值接近空白孔，無法有效檢測目標蛋白。
可能原因：

樣本中目標蛋白濃度過低（低于檢測下限）。

抗體失效或孵育時間/溫度不足。

樣本處理不當（如反復凍融、未加蛋白酶抑制劑）。
解決方案：濃縮樣本（超濾離心）或換用高靈敏度ELISA試劑盒。

檢查抗體有效期，確保孵育時間充足（可適當延長）。

新鮮樣本優(yōu)先，避免反復凍融，必要時添加保護劑。

3. 背景信號高——全是“噪音”怎么辦？

問題表現：空白孔或陰性對照OD值偏高，影響結果判讀。
可能原因：

封閉不充分（封閉液選擇不當或時間不足）。

抗體交叉反應或非特異性結合。

洗滌不徹底，殘留試劑導致假陽性。
解決方案：

優(yōu)化封閉條件（常用BSA或脫脂奶粉，封閉時間可延長至1-2小時）。

增加洗滌次數（如從3次增至5次），確保每孔洗滌液加滿。

更換特異性更高的抗體，或調整一抗/二抗稀釋比例。

4. 重復性差——同一樣本結果忽高忽低

問題表現：同一批樣本檢測，孔間差異大，CV值超過20%。
可能原因：

加樣操作不一致（手法、速度差異）。

酶標板邊緣效應（邊緣孔蒸發(fā)快，溫濕度不均）。

試劑未平衡至室溫直接使用。
解決方案：

使用多通道移液器，統(tǒng)一加樣速度和角度。

孵育時覆蓋板蓋，避免邊緣孔干燥，可棄用邊緣孔作空白。

所有試劑使用前室溫平衡30分鐘，避免溫度差異影響反應效率。

二、ELISA實驗小貼士：細節(jié)決定成敗

1.樣本處理：血清/血漿避免溶血，細胞裂解液需離心去除碎片，組織樣本勻漿充分。

1. 

2.試劑保存：抗體、酶結合物等按說明書要求保存（-20℃分裝避免反復凍融）。

3.儀器校準：定期檢查移液器準確性，酶標儀做波長和光路校準。

4.對照設置：每板必設空白孔、陰性對照和陽性對照，監(jiān)控系統(tǒng)誤差。

三、遇到問題別慌！ELISA排查流程圖

如果實驗結果異常，可以按以下步驟快速排查：

檢查試劑：是否過期？是否正確保存？

 

回顧操作：孵育時間、溫度、洗滌步驟是否規(guī)范？

 

分析數據：標準曲線是否正常？對照是否符合預期？

 

重復實驗：換新試劑或調整條件后重試。

ELISA雖然操作簡單，但“細節(jié)魔鬼”常常藏在加樣、洗滌、孵育這些基礎步驟里。遇到問題時，耐心對照說明書、排查關鍵環(huán)節(jié)，往往能事半功倍。如果反復失敗，不妨聯系試劑盒技術支持——畢竟，好的實驗結果=靠譜的試劑+規(guī)范的操作+一點點的運氣！

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