科研-人4-羥基苯丙酮酸雙加氧酶（HPD）檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品品牌：睿信生物 商品貨號(hào)：RXSM504260

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反應(yīng)種屬 人
檢測(cè)范圍 1.562ng/ml– 50ng/ml。
物理性能 試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無破損漏氣。
用途 用于檢測(cè)血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本中人4-羥基苯丙 酮酸雙加氧酶(HPD)的濃度。
實(shí)驗(yàn)原理 本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。在預(yù)包被抗 人4-羥基苯丙酮酸雙加氧酶(HPD)抗體（固相抗體）的微孔酶標(biāo)板中，加 入人4-羥基苯丙酮酸雙加氧酶(HPD)校準(zhǔn)品和待測(cè)樣本，再加入生物素標(biāo) 記抗體，經(jīng)過溫育與充分洗滌后，再加入HRP偶聯(lián)的親和素，經(jīng)過溫育 與充分洗滌，去除未結(jié)合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原 生物素標(biāo)記抗體-親和素酶的夾心復(fù)合物。加TMB顯色液，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物， 在終止液作用下，最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)上測(cè)定吸光度 （OD值），吸光度（OD值）與待測(cè)樣品中人4-羥基苯丙酮酸雙加氧酶 (HPD)的濃度正相關(guān)。擬合校準(zhǔn)品曲線，可以計(jì)算出樣本中人4-羥基苯丙 酮酸雙加氧酶(HPD)的濃度。
特異性 本試劑盒識(shí)別天然人4-羥基苯丙酮酸雙加氧酶(HPD)，與結(jié) 構(gòu)類似物無交叉。
重復(fù)性 批內(nèi)變異系數(shù) CV%小于 15%，批間變異系數(shù) CV%小于 15%。
回收率 回收率在 85%-115%之間
試驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材 1、酶標(biāo)儀（450nm）
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml 量筒
操作程序 1. 將各種試劑移至室溫平衡兩小時(shí)，取濃縮洗滌液，根據(jù)當(dāng)批檢測(cè)數(shù)量，用蒸餾水 1：20 稀釋，混勻后備用。
2. 將預(yù)包被板從密封袋中取出，設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，不加任何液體；每個(gè)校準(zhǔn)品設(shè) 2 孔，每孔加入對(duì)應(yīng)校準(zhǔn)品 50μl；其余每個(gè)檢測(cè)孔直接加待測(cè)血清或質(zhì)控品 50μl。
3. 除空白孔外所有孔加入生物素化抗原 50μl，混勻，貼上封板膜，置 37℃溫育 60 分鐘。
4. 手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各孔，靜置 10 秒甩干，重復(fù) 3 次后拍干。洗板機(jī)洗板：選擇洗滌 3 次程序洗板后拍干。
5. 每孔加入酶標(biāo)親合素 50μl（空白對(duì)照孔除外），混勻，貼上封板膜，置 37℃溫育 30 分鐘。
6. 手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各孔，靜置 10 秒甩干，重復(fù) 3 次后拍干。洗板機(jī)洗板：選擇洗滌 3 次程序洗板后拍干。
7. 每孔加顯色劑 A 50μl，顯色劑 B 50μl，振蕩混勻后，置 37℃避光顯色 15 分鐘，每孔加終止液 50μl。
用酶標(biāo)儀讀數(shù)，取波長(zhǎng)450nm，先用空白對(duì)照孔調(diào)零點(diǎn)，然后測(cè)定各孔光密度值（OD值）。
注意事項(xiàng) 1：如果試劑盒的組份需要再次使用，請(qǐng)確保上一次使用之后沒有被污染。
2：酶標(biāo)板單次未使用完，要謹(jǐn)記密封放到 2-8℃保存。
問題分析 ①問題描述：標(biāo)準(zhǔn)曲線差
可能原因及相應(yīng)對(duì)策：
1.試劑盒平衡時(shí)間不夠——不低于 2 個(gè)小時(shí)的室溫平衡
2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌
3.移液不精確——檢查和校正移液器
②問題描述：精密度低
可能原因及相應(yīng)對(duì)策：
1.洗滌不充分——按說明書要求充分洗滌和浸泡
2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑
3.重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模
4.加樣不精確——檢查和校正移液器
③問題描述：O.D值低
可能原因及相應(yīng)對(duì)策：
1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器，精確加入試劑
2.溫育時(shí)間不正確——保證充足的溫育時(shí)間
3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度
4.酶標(biāo)記物或底物失效——通過混合酶標(biāo)記物和底物，顏色迅速顯現(xiàn)來檢查
5.沒有加入終止液——按照說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟加入終止液
6.超出讀數(shù)時(shí)間讀數(shù)——在說明書推薦的讀數(shù)時(shí)間內(nèi)讀數(shù)
④問題描述：樣本值
可能原因及相應(yīng)對(duì)策：
1.不正確的樣本儲(chǔ)存方式——正確儲(chǔ)存樣本，使用新鮮樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)
2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法
3.待測(cè)物質(zhì)在樣本中含量低——使用新鮮樣本，重復(fù)實(shí)驗(yàn)
聲明 該試劑盒僅供研究使用，如將其用于臨床診斷或任何其他用途，我公司將不對(duì)因此產(chǎn)生的問題負(fù)責(zé)，亦不承擔(dān)任何法律責(zé)任。
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