Elisa檢測試劑盒開發(fā)【人elisa試劑盒】

發(fā)布時(shí)間：2021/6/1 8:41:52 閱讀次數(shù)：1005

ELISA試劑盒開發(fā)

ELISA試劑盒法檢測具有高速快捷易批量操作等優(yōu)點(diǎn),不同的生產(chǎn)廠家提供不同種類,不同類型的Elisa試劑盒產(chǎn)品,為科研用戶帶來極大的方便.

鐘鼎生物的 ZoonKit能夠針對(duì)特定檢測源,制備特異性抗原抗體,根據(jù)應(yīng)用需要量身定制檢測試劑盒,有效控制檢測試劑成本.我們恪守ELISA試劑盒開發(fā)的八大質(zhì)控原則,成功的為水產(chǎn) 畜禽疫病檢測科研用戶開發(fā)高敏經(jīng)濟(jì) 實(shí)用的疫病檢測試

劑盒.

第一部分: 項(xiàng)目溝通

了解項(xiàng)目背景及預(yù)期目標(biāo)確定開發(fā)方案及計(jì)劃.

可根據(jù)您的個(gè)性化需要開發(fā)特定ELISA 試劑盒.可采用ELISA夾心法競爭法（測定抗原）間接法（測定抗體）或競爭法（測定小分子化合物）定量檢測目標(biāo)物的含量.

第二部分：免疫原制備

1 分析目標(biāo)蛋白的基因和氨基酸序列,進(jìn)行抗原性及表達(dá)分析,密碼子優(yōu)化,完成全基因合成.

2 構(gòu)建重組蛋白的原核表達(dá)載體.

3 轉(zhuǎn)化E. Coli體系,進(jìn)行重組蛋白表達(dá)誘導(dǎo)和鎳柱親合純化,獲得1～3mg純化重組蛋白,純度>85%.（如需需要真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá),鐘鼎亦可提供相關(guān)服務(wù)）

4 制備免疫原用于動(dòng)物免疫.

如為小分靶標(biāo),則通過結(jié)構(gòu)分析進(jìn)行分子修飾并偶聯(lián)載體蛋白用于免疫及檢測.

第三部分：制備抗體

根據(jù)項(xiàng)目溝通結(jié)果確定制備抗體的種類,一般夾心ELISA需要不同表位的抗體用做配對(duì),建議同時(shí)進(jìn)行多克隆抗體和單克隆抗體的制備.確保高速的獲得高靈敏度的配對(duì)方式.其他類型的ELISA根據(jù)具體情況選擇.

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫

使用第一部分制備的免疫原免疫2只新西蘭兔和5只BALB/c鼠分別用于多克隆抗體及單克隆抗體的制備.免疫4-5次,收集抗血清檢測效價(jià),ELISA效價(jià)大于10萬以上進(jìn)行多克隆抗血清收集及單克隆抗體雜交瘤制備.

2 單克隆抗體雜交瘤制備

選擇與重組蛋白和天然蛋白免疫反應(yīng)最強(qiáng)的小鼠進(jìn)行細(xì)胞融合,通過ELISA篩選陽性克隆,將陽性克隆進(jìn)行亞克隆獲得陽性細(xì)胞株.將陽性克隆上清進(jìn)行表位鑒定,反應(yīng)性鑒定及親和力鑒定.選擇不同表位,反應(yīng)性強(qiáng)且親和力高的細(xì)胞株進(jìn)行后續(xù)抗體生產(chǎn).

3 抗體生產(chǎn)

多克隆抗血清進(jìn)行抗原親和純化,獲得特異性抗體10-20 mg.單克隆抗體生產(chǎn)選擇所需陽性細(xì)胞株進(jìn)行細(xì)胞擴(kuò)增,腹水制備,通過蛋白A親和純化獲得3-5 mg 純化抗體.

第四部分：ELISA 試劑盒制備

1 抗原或抗體標(biāo)記

根據(jù)開發(fā)ELISA的類型確定標(biāo)記抗原或者抗體.一般標(biāo)記HRP 或者生物素.

2 抗原抗體使用濃度優(yōu)化

檢測不同濃度抗原與抗體的反應(yīng)靈敏度,特異性.確定更好的抗原與抗體的使用濃度.

3 包被條件及反應(yīng)條件優(yōu)化

確定包被緩沖液,洗滌緩沖液及酶結(jié)合物保存液；確定抗體反應(yīng)溫度及反應(yīng)時(shí)間.

4 回收率測定

將標(biāo)準(zhǔn)品加入陰性樣品中確定回收率,需達(dá)到80%-120%的回收范圍.

5 批間差及批內(nèi)差測定

重復(fù)性檢測,批間差及批內(nèi)差需小于15%.

6 穩(wěn)定性測試

通過37度破壞性試驗(yàn)檢測試劑盒在37度條件下3天,7天,10天,14天的表現(xiàn).同時(shí)4度留樣以備長期檢測.一般試劑盒可在4度存放1年.

7 臨床樣品或真實(shí)樣本檢測

將客戶提供的其他方法驗(yàn)證的陽性樣品和陰性樣品進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證檢測,確定符合率.

8 試劑盒組裝

組裝5份ELISA試劑盒包括所有組分及說明書

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