操作高靈敏elisa試劑盒要注意那些問題？

發(fā)布時(shí)間：2020/12/1 10:43:17 閱讀次數(shù)：1478

正確操作是檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn),所以我們每一個(gè)步驟都至光重要,不可忽視,因?yàn)檫@關(guān)系到實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵是否.為了更好的進(jìn)行高靈敏elisa試劑盒實(shí)驗(yàn),下面給大家介紹一下操作高靈敏elisa試劑盒要注意那些問題.

1 吸取液體時(shí)速度不易太快,以免產(chǎn)生氣泡,吸取的量不夠準(zhǔn).

2 手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后.應(yīng)靜置15～30s,不要將一個(gè)酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中,防止交叉污染.甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干.

3 底物為TMB,避免與皮膚相接觸.終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸皮膚.

4 加樣后及時(shí)放人孵箱,標(biāo)本較多時(shí),要分批操作.按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間,防止孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗徹底.

5 作時(shí)必須戴手套,穿工作衣,嚴(yán)格執(zhí)行消毒隔離制度.

6 剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5 0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄.

7 同批號(hào)試劑組分不得混用.

8 洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈.

9 每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4.測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零.

10 要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性,可以使用蒸餾水和電子天平進(jìn)行確定（由于蒸餾水不含雜質(zhì),溫度環(huán)境為20%左右時(shí),lmL的水可以看作是lg 200 L的水可以看作是0 2g）每一把微量加樣器都應(yīng)該將其zui高量程和zui低量程進(jìn)行確定.

11 在使用微量加樣器時(shí),吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液.

12 檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn).能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器器械,具有一定總結(jié)和分析問題的能力,對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決.

13 操作前仔細(xì)閱讀說明書,嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作.不同批號(hào)的試劑不可混用.值得改進(jìn)的地方,反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn),比如洗板次數(shù)的掌握等.

14 評(píng)估試劑的實(shí)用性,試劑的穩(wěn)定與否,對(duì)準(zhǔn)確率的高低到頭重要.在試劑啟用前,應(yīng)進(jìn)行陰陽(yáng)對(duì)照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn),判定試劑符合要求后方可使用.

15 加樣要準(zhǔn)確快速.加樣不準(zhǔn)確,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結(jié)果.另外,顯色的深淺及A值的測(cè)定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)慎重.要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn),如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露在外,尤其室溫過高時(shí),保存期會(huì)縮短甚至失效.

16 使用校對(duì)過的微量移液器,排除自然誤差.移液器準(zhǔn)確與否對(duì)定量檢測(cè)尤為重要

17 嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間,顯色時(shí)間過短,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物的量過少,易出現(xiàn)假陰性.超過顯色要求時(shí)間后顯色,應(yīng)判為假陽(yáng)性,這可能與試劑本身有關(guān).加顯色劑后立即顯色,不可報(bào)陽(yáng)性,這可能是本底顯色的結(jié)果.

18 洗滌徹底,洗板不徹底,酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽(yáng)性.另外,洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽(yáng)性.

19 嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間,反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng),酶失活；反應(yīng)時(shí)間過短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性.

20 ELISA檢測(cè)操作步驟復(fù)雜,可強(qiáng)各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制,才能得到準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)結(jié)果.（內(nèi)容僅供參考,如有問題請(qǐng)來電咨詢,我們會(huì)竭誠(chéng)為您服務(wù)）